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篇1：人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导研究
人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导研究
目的 研究人参总皂苷(TSPG)刺激红系血细胞增殖有关的细胞内信号转导途径.方法 用集落形成实验检测TSPG刺激红系造血祖细胞(BFU-E、CFU-E)增殖的能力;噻唑蓝法(MTT)检测红细胞生成素(Epo)对脐血细胞增殖的影响;Western blotting法检测TSPG刺激脐血细胞24 h后EpoR表达的变化;免疫沉淀法检测TSPG对EpoR介导的蛋白酪氨酸激酶JAK2和信号传导及转录激活因子5(STAT5)的酪氨酸磷酸化的影响. 结果 1.TSPG10～75 mg/L均能提高脐血细胞形成BFU-E、CFU-E的集落产率,以25 mg/L提高幅度最明显;2.以MTT法测定得出Epo 2×103～5×104 IU/L均能促进脐血细胞的增殖,以5×103 IU/L促进增殖效果最明显;3.在不同剂量的TSPG刺激下,造血细胞EpoR的表达变化不明显;4.TSPG作用造血细胞24 h后,加入Epo继续刺激0、2、5、30 min,JAK2和STAT5的.酪氨酸磷酸化均增强.结论 TSPG在促进造血细胞增殖的过程中,对造血细胞EpoR表达的影响不显著,但可能在EpoR介导的信号转导过程中增强JAK2和STAT5的酪氨酸磷酸化发挥重要作用.
作 者：王建伟 王亚平王莎莉 姜蓉 WANG Jian-wei WANG Ya-ping WANG Sha-li JIANG Rong 作者单位：重庆医科大学基础医学院,重庆市生物化学与分子药理学重点实验室,重庆,400016 刊 名：解剖学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ANATOMICA SINICA 年，卷(期)：2006 37(6) 分类号：Q253 关键词：人参总皂苷 红细胞生成素受体 JAK2 信号传导及转录激活因子5 噻唑蓝法篇2：氧化铝柱层析精制三七总皂苷工艺研究论文
氧化铝柱层析精制三七总皂苷工艺研究论文
【摘要】 目的 研究氧化铝柱层析精制三七总皂苷工艺。方法 采用HPLC法测定三七总皂苷的含量,考察洗脱剂的浓度、洗脱剂的用量和吸附剂用量对工艺的影响。结果 确定最佳精制工艺为:洗脱剂的浓度为55%乙醇,洗脱剂的用量为10倍吸附剂的用量,吸附剂用量为5倍三七总皂苷的用量。结论 通过氧化铝柱层析精制后,三七总皂苷的收率大于70%,含量大于80%,说明此精制工艺是可行的。
【关键词】 三七总皂苷 氧化铝 高效液相法
三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.) F.H.Chen的干燥根及根茎[1],三七总皂苷是中药三七的有效部位,主要含有三七皂苷R1,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1等达玛烷型三萜皂苷类化合物[2]。现代药理研究证明:三七总皂苷具有多方面的生物活性,主要表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌代谢、抗自由基、抗凝、钙拮抗等方面[3]。
目前三七总皂苷的富集与纯化一般采用大孔吸附树脂来完成[4],纯化后三七总皂苷的含量达到60%以上。为了提高药物的安全性和有效性,提高其成药原料药的纯度。本实验拟采用氧化铝柱层析对三七总皂苷的纯化物进行精制[5],并对工艺进行了考察,为进一步的制剂学研究打下基础。
1 仪器与试药
1.1仪器与设备
RE 52-99旋转蒸器(上海亚荣生化仪器厂);DK-S22型电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司);JA-1003型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限医疗设备厂);美国Tsp高效液相色谱仪;Tsp P-2000泵、TspUV-1000UV-VIS检测器;TspPC1000色谱工作站;色谱柱:ODSC18柱(250×4.6mm,5μm,大连依利特科学仪器有限公司)。
1.2材料与试剂
三七总皂苷提取物(云南玉溪天然药物有限公司);三七总皂苷对照品:三七皂苷R1(0745-200008)、人参皂苷Rg1(0703-200015)、人参皂苷Rb1(0704-200115)对照品(中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯,水为二次蒸馏水。
2 方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:ODSC18柱(250×4.6mm,5μm);流动相:A为乙腈,B为水;流速:1.0mL・min-1;采用梯度洗脱法,0~8分钟(26:74),8:10~40:40分钟(34:66);检测波长203nm;柱温:30℃;进样量20μL。
2.2线性范围关系的考察
分别精密称取三七总皂苷对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1各约6.0mg、2.5mg和2.5mg置25mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取此溶液3、4、5、6、7mL置50mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。精密吸取上述对照品溶液各注入液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积,以峰面积(A)对进样量(μg)进行线性回归,三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1回归方程分别为:A=327127.8W-681.2(r=0.9991);A=406964.1W+787.9(r=0.9991);A=262563.9W-5498.7(r=0.9996),三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂Rb1分别在进样量0.2981~0.6956μg、1.2768~2.9792μg和1.1539~2.6925μg范围内时,峰面积与进样量具有良好的线性关系。
2.3精密度试验
取含量测定项下对照品溶液,连续进样六次,记录色谱图,量取峰面积,计算平均值及相对标准偏差,三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的峰面积平均值分别为151792、802039.7和476940.7,RSD分别为0.81%、1.73%和1.62%,结果表明,本方法精密度良好。
2.4供试品溶液的制备
取上柱流出液浓缩至干,精密称定干粉一定量,用甲醇溶解并转溶至10mL量瓶,滤过。精密量取续滤液1mL置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
2.5工艺参数的考察
2.5.1洗脱剂浓度的考察
取三七总皂苷原料3份,每份10g。分别用50%乙醇适量溶解,分别转移至氧化铝柱(中性氧化铝50g,内径4cm,干法装柱),然后分别用35%、55%和75%乙醇洗脱,分别收集洗脱液,减压回收乙醇,真空干燥,按HPLC法测定总皂苷含量和收率。
从以上结果可知,当用75%乙醇洗脱时,总皂苷含量最高,但收率太低,而用55%乙醇洗脱时虽然收率比用35%乙醇洗脱时略低,但总皂苷含量高6%左右,因此,洗脱剂确定为55%乙醇。
2.5.2洗脱剂用量考察
取三七总皂苷原料3份,每份10g。分别用50%乙醇适量溶解,分别转移至氧化铝柱(中性氧化铝50g,内径4cm,干法装柱),然后用55%乙醇洗脱,分别收集洗脱液,减压回收乙醇,真空干燥,按HPLC法测定总苷含量和收率。
从以上结果可知,随着洗脱剂用量的'增加,得到总皂苷的含量逐渐下降,考虑收率,以10倍量55%的乙醇洗脱比较合适。
2.5.3吸附剂用量考察
取三七总皂苷原料3份,每份10g。分别用50%乙醇适量溶解,分别转移至氧化铝柱(柱1:中性氧化铝25g,内径2cm;柱2:中性氧化铝50g,内径4cm;柱3:中性氧化铝100g,内径5cm),然后用10倍量55%乙醇洗脱,分别收集洗脱液,减压回收乙醇,真空干燥,按HPLC法测定总苷含量和收率。
从以上结果可知,随着吸附剂氧化铝用量的增加,收率逐渐降低,而含量呈上升趋势,氧化铝用量为5倍与10倍相比较,前者虽然总皂苷含量略低,但已经大于80%,而且收率较高,因此吸附剂氧化铝的用量确定为5倍。
2.6中试验证结果
取三七总皂苷原料3份,精密称取质量分别为44.4g,42.8g和47.9g,分别用50%乙醇适量溶解,分别转移至氧化铝柱,中性氧化铝用量为三七总皂苷的5倍,然后用10倍量55%乙醇洗脱,分别收集洗脱液,在60℃以下减压回收乙醇,真空干燥,按HPLC测定方法,分别测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。
从以上三批中试结果可知,按选定的精制工艺可以制备总皂苷含量大于80%的三七总皂苷原料,且收率大于70%,说明此精制工艺是可行的。
3 结论
3.1氧化铝柱层析精制三七总皂苷的最佳工艺为:洗脱剂的浓度为55%乙醇,洗脱剂的用量为10倍量吸附剂的用量,吸附剂用量为5倍三七总皂苷的用量。
3.2本实验提出了一种新的三七总皂苷的精制方法―氧化铝柱层析,具有分离效果好、工艺简单、投资少、处理量较大等优点。有文献报道[6],大孔吸附树脂法具有选择性好、吸附容量大、安全无毒、再生容易等优点,但由于应用时间相对较短,还存在着一些问题,因此,在纯化中药有效成分的工艺过程中,两种纯化方法可以互相结合,取长补短,共同促进中药制剂的不断发展。
人参总皂苷诱导红系血细胞增殖的信号转导研究（共2篇）
