【导语】“friona”通过精心收集，向本站投稿了6篇采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体，下面是小编为大家整理后的采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体，如果喜欢可以分享给身边的朋友喔!
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篇1：采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体
采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体
目的:采用基于attLXattR的λ噬菌体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒栽体(Ad-hBMP-2).方法:从pcDNA3.1质粒中获取目的基因hBMP-2片段,连入带attL1、attL2位点的入门载体pENTRTM11中.形成入门克隆,将入门克隆与带attR1、attR2位点的目的载体Ad/CMV/V5-DEST在高效重组酶作用下发生体外重组形成表达克隆ad-BMP-2,经鉴定将ad-BMP-2线性化后转入293A细胞包装,通过细胞裂解法获得人骨形态发生蛋白-2的'基因重组腺病毒珠Ad-hBMP-2,将其扩增,采用western blotting技术分析目的蛋白表达.结果:经酶切及测序证实目的基因BMP-2片段按正确方向重组入目的载体中,带BMP-2的目的栽体在293A细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,测得病毒滴度为2.5×109pfu/ml.western blotting结果证实Ad-hBMP-2在293A细胞中高效表达hBMP-2蛋白.结论:本实验首次利用基于λ噬菌体的住点特异性重组系统的GatewayTM技术成功构建了Ad-hBMP-2,该技术与传统构建方法比较具有高效性和灵活性,为进一步研究BMP-2的生理功能和利用BMP-2进行骨基因治疗奠定了实验基础.
作 者：蒋红梅 龙洁 汤炜 田卫东 刘磊 林云锋 王杭 李鹏 JIANG Hong-mei LONG Jie TANG Wei TIAN Wei-dong LIU lei LIN Yun-feng WANG Hang LI Peng 作者单位：四川大学华西口腔医学院,成都,610041 刊 名：现代生物医学进展 ISTIC英文刊名：PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE 年，卷(期)：2008 8(2) 分类号：Q78 关键词：骨形态发生蛋白-2 GatewayTM技术 重组腺病毒篇2：乙肝病毒X基因重组腺病毒载体的构建
乙肝病毒X基因重组腺病毒载体的构建
目的 为了探讨HBx基因与肝癌发生的.关系,构建HBx基因重组腺病毒载体.方法 应用pAdEasyTM腺病毒载体系统,首先从质粒pCDNA3.l-HBx中酶切得到HBx基因,插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,得到pAdTrack-CMV-HBx,将其PmeⅠ酶切线性化后,转到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中,通过同源重组得到重组腺病毒质粒载体pAd-HBx,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚肾293细胞,产生重组腺病毒颗粒Ad-HBx.结果 PCR和酶切鉴定证明重组腺病毒Ad-HBx构建成功,在转染的293细胞中可以观察到绿色荧光蛋白GFP.结论 成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒载体,为后续研究奠定了基础.
作 者：史震 李向阳 周峰 李金龙 尤红娟 汤仁仙 SHI Zhen LI Xiangyang ZHOU Feng LI Jinlong YOU Hongjuan TANG Renxian 作者单位：徐州医学院微生物与免疫学教研室,江苏,徐州,221002 刊 名：徐州医学院学报 ISTIC英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU 年，卷(期)：2010 30(3) 分类号：Q782 R512.6+2 关键词：乙型肝炎病毒 HBx基因 腺病毒载体篇3：小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的:构建小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的'死亡受体(Mouse killer,MK)基因干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MK的siRNA干扰序列,将其克隆到穿梭载体psES-HUS上,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MKsiRNA,在HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒.用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞,RT-PCR及Western Blot检测基质细胞中MK的mRNA及蛋白表达水平.结果:Adeasy-SES-HUS-MKsiRNA混合液均效价为6.8 X 10~(11)pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞48h后,MK的mRNA及蛋白水平均显著下调.结论:构建的MK干扰表达腺病毒能有效地抑制MK基因的表达,为进一步研究MK在小鼠子宫基质细胞的功能提供了有效的工具.
作 者：杨根岭 张晋平徐倩 谭冬梅 赖国旗 谭毅 作者单位：重庆医科大学实验动物中心,重庆,400016 刊 名：重庆医科大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF CHONGQING MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2010 35(2) 分类号：Q953.5 关键词：Mouse killer基因 RNA 干扰 重组腺病毒 Mouse killer gene RNA interference Recombinant adenovirus篇4：人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定
人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定
目的 构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况.方法 采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的`测定和对HepG2细胞感染效率的监测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010 pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010 pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力.结论 应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体.
作 者：蒋春华 高钰琪 黄庆愿 黄缄 贺伟峰 段小军 JIANG Chun-hua GAO Yu-qi HUANG Qing-yuan HUANG Jian HE Wei-feng DUAN Xiao-jun 作者单位：蒋春华,高钰琪,黄庆愿,黄缄,JIANG Chun-hua,GAO Yu-qi,HUANG Qing-yuan,HUANG Jian(第三军医大学,高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室,全军高原医学重点实验室,重庆,400038)贺伟峰,HE Wei-feng(第三军医大学,西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038)
段小军,DUAN Xiao-jun(第三军医大学,西南医院骨关节中心,全军矫形外科中心,重庆,400038)
刊 名：第三军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)：2006 28(20) 分类号：Q782 Q789 关键词：腺病毒 HIF-1α基因 同源重组篇5：腺病毒载体构建重组扩增纯化委托技术服务合同书
腺病毒载体构建重组扩增纯化委托技术服务合同书
服务方（甲方）：_________
地 址：_________
邮 编：_________
电 话：_________
传 真：_________
e-mail：_________
开户银行：_________
帐 号：_________
委托方（乙方）：_________
地 址：_________
邮 编：_________
电 话：_________
传 真：_________
甲乙双方根据《中华人民共和国合同法》等法律法规，在平等互利的原则下，经协商一致，订立本合同，以兹双方共同遵照执行。
第一条 病毒名称
甲方接受乙方的委托，为其载体构建、重组、扩增和纯化_________腺病毒，腺病毒滴度_________pfu/ml。
第二条 费用及价格（人民币）
1．病毒的载体构建、重组、扩增和纯化所需的原料由甲方自行购买；
2．合同总价_________元，（大写）_________。
第三条 乙方责任
1．乙方所购买的甲方腺病毒产品及其一切复制品、衍生产品将只供乙方或乙方所能控制的实验组中进行实验研究，在任何情况下决不用于人类，决不用于以谋利（直接或间接）为目的的生物制药以及临床分析等方面。
2．未征得甲方授权或同意，乙方不能以任何名义将购买的腺病毒产品及其一切复制品、衍生产品转移、出售或租借给他人使用。
3．保证乙方应用甲方腺病毒产品及其一切复制品、衍生产品进行的研究符合现行的法律法规，不得应用甲方腺病毒产品进行有损于人类安全或其它非法目的的研究。
4．所有在研究过程中经本产品及其一切复制、衍生产品处理过之动物、植物、蛋类以及乳制品等均应妥善处理，决不可食用或出售。
5．乙方及乙方的课题组在发表文章中注明该重组腺病毒购自甲方，并将已发表文章复印一份给甲方。
6．甲方的腺病毒产品是由人5型腺病毒改造而来，在特殊情况下仍可能具有一定的致病性，乙方必须遵守国家安全使用腺病毒原则。任何违反该原则而引起的实验人员或其他人员的健康问题，甲方概不承担法律责任。
7．若乙方不再应用本产品须将其销毁或返还甲方。
8．乙方承诺在使用本产品的过程中不会做出任何有损于甲方的言论或行为。
9．乙方对其提供技术服务的病毒不得转卖、转送及商业化用途。
10．乙方在收到甲方提供的腺病毒制品后，应立即将其分成小份装于无菌的病毒冻存管中并低温保存于-20℃，避免反复冻融而导致病毒滴度下降。由于使用不当引起的质量问题由乙方承担。
第四条 甲方责任
1．甲方所提供之腺病毒产品需经过严格的质量控制，其所携带的基因经过测序确证无误。
2．甲方的腺病毒产品通过快递公司送达乙方。
3．如果乙方对产品质量有任何异议，请在货到后一周内及时与甲方联系，甲方将复核产品的质量状况，并给予乙方满意的答复。
第五条 甲方应在_________年_________月_________日前完成技术服务工作，并向乙方提交下列成果及其报告：
1．成果：重组腺病毒，分别为_________。
2．载体构建流程报告。
3．病毒重组及鉴定报告。
4．病毒颗粒数检测报告。
5．病毒滴度检测报告。
6．病毒纯度hplc检测报告。
第六条 付款方式
1．乙方在合同签订当日应当支付合同费用的1/3，即人民币_________。
2．甲方向乙方提交第六条所列的成果当天，乙方支付合同费用的1/3，即人民币_________。
3．甲方向乙方提交第六条所列的报告当天，乙方最后支付合同费用剩余的款项，即人民币_________。
第七条 违约责任
1．甲方如不按时向乙方提交第六条所列的成果，每拖延一天，应向乙方偿付合同金额千分之三的违约金。
2．合同履行期间，乙方不得自行解除本合同，否则乙方总额向甲方支付违约金。
第八条 争议解决方法
乙方对产品质量有任何异议，在货到后一周内及时与甲方联系，甲方将复核产品的质量状况，并给予乙方明确的答复。
本合同未尽事宜，双方可另行协商解决。合同履行期间双方发生争议，不能协商解决的，由合同履行地所在仲裁委员会仲裁解决。
第九条 其他约定
1．备注：_________（甲乙双方需增加的条款）
2．本合同一式两份，甲乙双方各执一份，并具有同等法律效力。
3．本合同的附件具有同等法律效力。
4．本合同经双方签字并加盖公章后即生效。
甲 方（盖章）：_________ 乙 方（盖章）：_________
代表人：_________ 代表人：_________
研究生导师：_________
_________年____月____日 _________年____月____日
篇6：携带细胞周期调控基因P14ARF的重组腺病毒的构建
携带细胞周期调控基因P14ARF的重组腺病毒的构建
目的构建携带参与细胞周期调控的.p14ARF基因的重组腺病毒载体.方法将野生型p14ARF全长cDNA基因片段插入腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带p14ARF的重组腺病毒AdEasy-GFP-p14ARF.结果成功构建了AdEasy-GFP-p14ARF的重组腺病毒载体系统,经测定腺病毒载体滴度达2.3×109 efu/mL.结论构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-p14ARF可望有效地将p14ARF基因导入喉癌细胞株/组织内,为进一步研究喉癌细胞信号转导干预治疗机制提供实验基础.
作 者：鲜均明 周光耀 梁传余 刘世喜 XIAN Jun-ming ZHOU Guang-yao LIANG Chuan-yu LIU Shi-xi 作者单位：鲜均明,XIAN Jun-ming(四川大学基础与法医学院,人体解剖学教研室,四川,成都,610041)周光耀,梁传余,刘世喜,ZHOU Guang-yao,LIANG Chuan-yu,LIU Shi-xi(四川大学华西医院,耳鼻咽喉科,四川,成都,610041)
刊 名：华西口腔医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY 年，卷(期)：2006 24(3) 分类号：Q782 关键词：细胞信号转导 重组腺病毒 基因治疗 喉癌采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体（推荐6篇）
