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篇1：pfl-act基因在大肠杆菌中的高效表达及其纯化
pfl-act基因在大肠杆菌中的高效表达及其纯化
丙酮酸甲酸裂解酶是肠道细菌在厌氧代谢中十分关键的酶,丙酮酸甲酸裂解酶激活因子(pyruvate formate lyase activator,PFL-A)在功能上具有重要的作用.为进一步研究PFL-A的`激活机理,以大肠杆菌K-12的基因组为模板,通过GenBank上公布的序列设计引物,扩增出目的基因,克隆到pMD18-T载体,经测序,所扩增出的基因与pfl-act基因具有99%的同源性.将pfl-act连接到高效表达载体pET-22b(+)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,结果发现,pfl-act以包涵体形式表达.改变诱导剂、诱导剂量或培养温度,对包涵体的形成均没有明显的影响.
作 者：杨登峰 韦宇拓 黄志明 周兴 黄日波 YANG Deng-feng WEI Yu-tuo HUANG Zhi-ming ZHOU Xing HUANG Ri-bo 作者单位：杨登峰,黄志明,周兴,YANG Deng-feng,HUANG Zhi-ming,ZHOU Xing(广西科学院,广西,南宁,530003)韦宇拓,黄日波,WEI Yu-tuo,HUANG Ri-bo(广西大学,生命科学与技术学院,广西,南宁,530005;广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西,南宁,530005)
刊 名：广西农业生物科学 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GUANGXI AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL SCIENCE 年，卷(期)：2006 25(4) 分类号：Q782 关键词：丙酮酸甲酸裂解酶激活因子 包涵体 高效表达篇2：重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测
重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测
为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用,以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的`高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础.
作 者：王文棋 盖颖 陆海 蒋湘宁 WANG Wen-qi GAI Ying LU Hai JIANG Xiang-ning 作者单位：北京林业大学生物科学与技术学院 刊 名：北京林业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF BEIJING FORESTRY UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 28(3) 分类号：Q559+.1 关键词：DNA重组酶Cre pET30-Cre高效表达 一步纯化 Cre酶活性检测篇3：人神经生长因子基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化
人神经生长因子基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化
从人胎盘组织中提取总DNA,经PCR扩增编码人β神经生长因子(β-NGF)成熟肽的基因,并克隆到大肠杆菌表达载体pET15b中.重组质粒pET15b-NGF经测序与报道的完全一致.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达得到16kDa的目的蛋白带,与预期的.大小一致,NGF表达量约占全菌总蛋白的25%.经过亲和层析柱(Ni2+-charged IDA his-bind column)纯化后得到了单一的NGF蛋白条带,蛋白纯度可达90%以上,从每升表达菌液中可以得到4.56mgNGF.表达产物的Western印迹鉴定结果显示:重组人神经生长因子能与兔抗人β-NGF的多克隆抗体发生特异性结合反应,在16kDa处出现单一的条带,表明诱导表达的重组NGF具有免疫学活性.鸡胚背根神经节感觉神经元鉴定试验表明,表达的重组NGF具有良好的生物学活性.
作 者：赵娟 何冰 江汉民 程秀玮 俞新大 ZHAO Juan HE Bing JIANG Han-min CHENG Xiu-wei YU Xin-da 作者单位：南开大学生命科学学院,天津,300071 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(6) 分类号：Q786 关键词：人β神经生长因子 基因克隆 表达 纯化 生物活性篇4：枯草杆菌纳豆激酶基因在大肠杆菌中的优化高效表达
枯草杆菌纳豆激酶基因在大肠杆菌中的优化高效表达
在克隆、表达纳豆激酶基因的'基础上,对IPTG浓度以及诱导时间两个重要影响因子进行优化选择.结果表明,在IPTG 100μg/mL诱导2.5h时,纳豆激酶的表达量相对较高,约占菌体蛋白重量的46.63%,为实验最佳的诱导条件.
作 者：扈会平张立全 格根通拉嘎 HU Hui-ping ZHANG Li-quan Gegentonglaga 作者单位：扈会平,HU Hui-ping(丽珠集团制药厂,广东,珠海519000;内蒙古大学,生命科学学院,内蒙古,呼和浩特010021)张立全,格根通拉嘎,ZHANG Li-quan,Gegentonglaga(内蒙古大学,生命科学学院,内蒙古,呼和浩特010021)
刊 名：内蒙古师范大学学报（自然科学汉文版） ISTIC英文刊名：JOURNAL OF INNER MONGOLIA NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2008 37(4) 分类号：Q786 关键词：枯草杆菌 纳豆激酶 优化表达 大肠杆菌篇5：抗菌肽Dermaseptin S4及其突变体基因在大肠杆菌中的表达
抗菌肽Dermaseptin S4及其突变体基因在大肠杆菌中的表达
目的 构建表达抗菌肽Dermaseptin S4(DS4)及其突变体K4-S4的工程菌,并表达目的 蛋白.方法 采用重叠延伸PCR法设计和扩增抗菌肽DS4及K4-S4基因,定向克隆入载体pUC-18中,经酶切、测序鉴定,重组至表达载体pGEX-4T-1中,构建抗菌肽DS4及K4-S4基因表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)plyS,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE鉴定.结果 构建的抗菌肽DS4及K4-S4基因工程菌所表达的目的 蛋白,经SDS-PAGE鉴定可见相对分子质量34 000的.特异性目的 条带,37℃诱导5 h的蛋白表达量最高,且多数以包涵体形式存在.结论 已成功构建抗菌肽DS4及K4-S4工程菌,并表达目的 蛋白,为进一步研究其功能和应用奠定了基础.
作 者：张庆华 韩跃武 谢俊秋 卢天龙 任惠子 冯惟萍 作者单位：兰州大学基础医学院生物化学与分子生物学研究所,兰州,730000 刊 名：中国生物制品学杂志 ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS 年，卷(期)：2008 21(4) 分类号：Q78 关键词：抗菌肽 Dermaseptin S4 突变体 大肠杆菌 表达篇6：枯草杆菌脂肪酶基因在大肠杆菌中的诱导分泌表达
枯草杆菌脂肪酶基因在大肠杆菌中的诱导分泌表达
借助生物信息学对已克隆的枯草杆菌脂肪酶LipB2全长基因序列进行比对分析.结果显示该脂肪酶基因全长635 bp,编码包括31个氨基酸分泌型信号肽在内的211个氨基酸,与NCBI GenBank中已报道的枯草杆菌属脂肪酶核苷酸序列有94.0%的一致性.将该基因克隆到pET-28a(+)表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用枯草杆菌脂肪酶的信号肽序列进行了分泌表达.SDS-PAGE电泳显示分泌表达的.脂肪酶分子质量约为21 kD.对表达条件优化后,在30℃、大肠杆菌菌液OD_(600)值为1 8、乳糖诱导浓度为1 5 mM、摇瓶发酵10 h后大肠杆菌分泌表达26 0 U/mL重组脂肪酶,相比较IPTG的诱导,既实现了脂肪酶的高效表达,又节省了成本.
作 者：李海军 王林刚 王治泽 陈芳 高剑峰 Li Haijun Wang Lingang Wang Zhize Chen Fang Gao Jianfeng 作者单位：石河子大学生命科学学院,石河子,832003 刊 名：生物技术通报 PKU英文刊名：BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年，卷(期)：2010 “”(3) 分类号：Q93 关键词：乳糖诱导 IPTG诱导 枯草杆菌 脂肪酶基因 分泌表达 Induction of lactose Induction of IPTG Bacillus subtili Lipase gene Secretory expression★ 强基计划
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pfl-act基因在大肠杆菌中的高效表达及其纯化（集锦6篇）
