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篇1：乳牛瘦蛋白基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立
乳牛瘦蛋白基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立
根据GenBank中瘦蛋白(leptin)基因序列设计合成了引物和探针,对荧光定量PCR的方法进行了方法学的评估,建立了TaqmanMGB荧光定量RT-PCR检测方法.结果表明,由pMD-18T瘦蛋白所构建的.标准曲线线性关系良好,建立的瘦蛋白基因荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强(可检测出低于10个拷贝/μL的样品),准确可靠.
作 者：张才 牛淑玲 夏成 刘国文 王哲 ZHANG Cai NIU Shu-ling XIA Cheng LIU Guo-wen WANG Zhe 作者单位：张才,牛淑玲,刘国文,王哲,ZHANG Cai,NIU Shu-ling,LIU Guo-wen,WANG Zhe(吉林大学,畜牧兽医学院,吉林,长春,130062)夏成,XIA Cheng(黑龙江八一农垦大学,动物科技学院,黑龙江,大庆,163319)
刊 名：中国兽医科学 ISTIC PKU英文刊名：VETERINARY SCIENCE IN CHINA 年，卷(期)： 36(5) 分类号：S815.3 Q503 关键词：乳牛 瘦蛋白基因 荧光定量RT-PCR篇2：小麦硫转运蛋白基因半定量RT-PCR检测方法的建立
小麦硫转运蛋白基因半定量RT-PCR检测方法的建立
为进一步研究干旱胁迫下小麦硫转运蛋白基因(ST)的表达,选用小麦α-Tubulin基因(Ta)为内参照,提取小麦根系总RNA,反转录cDNA,同批异管对2个基因片段进行PCR扩增.通过对PCR体系中Mg2+浓度、退火温度及循环次数的优化和对体系重复性、准确性的'分析,最终建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系.该体系可用于比较不同小麦样品间硫转运蛋白基因的表达,且因为两对引物均垮内含子,其稳定RT-PCR体系,也为实验室建立小麦mRNA反转录体系提供了参考依据.
作 者：陈昕 王保莉 曲东 张燕 CHEN Xin WANG Bao-li QU Dong ZHANG Yan 作者单位：陈昕,王保莉,张燕,CHEN Xin,WANG Bao-li,ZHANG Yan(西北农林科技大学,生命科学学院,陕西杨陵,712100)曲东,QU Dong(西北农林科技大学,资源环境学院,陕西杨陵,712100;黄土高原土壤侵蚀与旱地农业国家重点实验室,陕西杨陵,712100)
刊 名：西北植物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA 年，卷(期)：2006 26(2) 分类号：Q343.1 S512.1 关键词：小麦 硫转运蛋白 半定量RT-PCR α-Tubulin篇3：人GABRA1实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立
人GABRA1实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立
根据GenBank上人GABRA1基因的序列,设计并合成特异性的引物及探针,采用TaqMan探针法建立了荧光定量PCR法,以常规PCR产物为标准品,建立标准曲线.结果表明,标准曲线Ct值检测范围为12.07-32.72,相关系数为0.999,扩增效率为96.4%.建立的'GABRA1TaqMan探针实时荧光定量方法具有线性范围广、扩增效率高、检测时间短、敏感性高等特点.
作 者：李宁 何进宇 刀筱芳 伍学英 龚玉来 冯文 高利民 徐亚欧 LI Ning HE Ji-yu DAO Xiao-fang WU Xue-ying GONG Yu-lai FENG Wen GAO Li-min XU Ya-ou 作者单位：李宁,刀筱芳,徐亚欧,LI Ning,DAO Xiao-fang,XU Ya-ou(西南民族大学生命与科学技术学院,四川成都,610041)何进宇,伍学英,龚玉来,冯文,高利民,HE Ji-yu,WU Xue-ying,GONG Yu-lai,FENG Wen,GAO Li-min(成都三六三医院,四川成都,610041)
刊 名：西南民族大学学报（自然科学版） ISTIC英文刊名：JOURNAL OF SOUTHWEST UNIVERSITY FOR NATIONALITIES(NATRUAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)： 34(1) 分类号：Q7 R74 关键词：GABRA1 TaqMan探针 实时荧光定量PCR篇4：人偏肺病毒TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及初
人偏肺病毒TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用
目的:建立人偏肺病毒(hMPV)核酸特异的快速、敏感的`TaqMan-MGB探针实时定量RT-PCR检测方法.方法:分别设计hMPV特异的引物与荧光标记探针,合成hMPV绝对定量RNA模板,建立实时荧光定量PCR方法,并与常规RT-PCR平行比较,对其灵敏性、特异性和可重复性,以及用于临床样本的适用性等进行评价.结果:本方法可对hMPV进行特异性诊断,检测灵敏度可达10拷贝/25 μL,检测线性范围至少可达10 1～10 6拷贝/反应,且实验重复性好,初步应用于北京地区采集的158份临床鼻咽拭子标本,定量RT-PCR检出31份标本阳性,明显高于常规RT-PCR方法(22/158).结论:建立了人偏肺病毒TaqMan-MGB探针定量RT-PCR检测方法,并初步证实可用于临床鼻咽拭子标本的检测,为开展hMPV的流行监测及临床早期诊断提供了技术手段.
作 者：陆柔剑 张陵林 谭文杰 周为民 王仲 彭 阮力 LU Rou-Jian ZHANG Ling-Lin TAN Wen-Jie ZHOU Wei-Min WANG Zhong PENG Kun RUAN Li 作者单位：陆柔剑,张陵林,谭文杰,周为民,阮力,LU Rou-Jian,ZHANG Ling-Lin,TAN Wen-Jie,ZHOU Wei-Min,RUAN Li(中国疾病预防控制中心,病毒病预防控制所,北京,100052)王仲,WANG Zhong(北京协和医院,北京,100730)
彭,PENG Kun(北京市第六医院,北京,100007)
刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2008 19(2) 分类号：Q78 关键词：人偏肺病毒 TaqMan-MGB探针 实时定量PCR篇5：粪便中肠球菌SYBR GreenI荧光定量PCR检测方法的建立
粪便中肠球菌SYBR GreenI荧光定量PCR检测方法的建立
目的 利用SYBR GreenI荧光定量PCR方法,建立肠球菌实时荧光PCR检测方法,并初步应用于粪便中肠球菌的检测.方法 根据GenBank发表的肠球菌23S rRNA基因序列的.保守区域设计合成特异性的引物;利用构建的质粒标准品绘制两种标准曲线,构建基因拷贝数、细菌数为分析指标的定量分析模型并初步应用于粪便标本的检测分析.结果 所建立的SYBR GreenI荧光定量PCR方法检测灵敏度可达7个拷贝数/reaction.粪便样本根据实时荧光定量PCR方法所得的理论数值与培养菌值之间差异无显著性(P＞0.05).非炎性腹泻标本中菌数与健康成人标本中菌数差异无显著性(P＞0.05).灵敏度曲线所得的数值大于菌数标准曲线,可能由于DNA提取过程中存在部分的损失.检测粪便标本结果显示SYBR GreenI荧光定量PCR方法较平板计数法敏感、快捷、简便.结论 本研究建立了一种灵敏、特异、简便易行的肠球菌定量检测方法.
作 者：任月 袁杰利 卢行安 曹涤菲 蔡竹 REN Yue YUAN Jie-li LU Xing-an CAO Di-fei CAI Zu 作者单位：任月,REN Yue(大连医科大学,辽宁,大连,116027)袁杰利,YUAN Jie-li(大连医科大学,微生态学教研室,辽宁,大连,116027)
卢行安,LU Xing-an(辽宁出入境检验检疫局,辽宁,大连,116001)
曹涤菲,CAO Di-fei(黑龙江八一农垦大学,黑龙江,大庆,163319)
蔡竹,CAI Zu(大连医科大学,组织人事部,辽宁,大连,116027)
刊 名：中国微生态学杂志 ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY 年，卷(期)： 19(6) 分类号：Q378.992 关键词：肠球菌 荧光定量PCR 粪便篇6：实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用
实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用
目的:建立一种快速、定量、特异、灵敏的PCR方法用于对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的`早期诊断和疫情监测.方法:根据GenBank登录的IHHNV毒株序列,使用生物学软件进行序列比对,在IHHNV保守区序列设计特异性引物与Taqman探针.对实时荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间,提高特异性、灵敏度、重复性,并与普通PCR进行盲样测试的比对.结果:本法线性范围5×102～5×107拷贝/ml,检出限5×101拷贝/ml,灵敏度超过普通PCR100倍,特异性高于普通PCR,重复性极好(S=0.035～0.39,CV=0.13%～1.05%),检测时间为普通PCR的1/5,现场盲样IHHNV检出阳性率高于普通PCR 26.00%.结论:本研究建立Taqman实时荧光定量PCR用于对虾IHHNV检测具有特异、灵敏、快速、定量、重复性好等优点.
作 者：王忠发 王建跃 卢亦愚 何伟贤 王学海 Wang Zhong-fa Wang Jian-yue Lu Yi-yu He Wei-xian Wang Xue-hai 作者单位：王忠发,王建跃,何伟贤,Wang Zhong-fa,Wang Jian-yue,He Wei-xian(浙江省舟山市疾病预防控制中心,浙江舟山,316000)卢亦愚,Lu Yi-yu(浙江省疾病预防控制中心,杭州,310009)
王学海,Wang Xue-hai(浙江大学医学院病原生物研究所,杭州,310031)
刊 名：中国卫生检验杂志 ISTIC英文刊名：CHINESE JOURNAL OF HEALTH LABORATORY TECHNOLOGY 年，卷(期)：2007 17(9) 分类号：Q75 关键词：实时荧光定量PCR IHHNV 病毒载量篇7：赤潮研究中圆海链藻实时荧光定量PCR检测方法的建立
赤潮研究中圆海链藻实时荧光定量PCR检测方法的建立
摘要：为建立快速、准确的鉴定和定量检测赤潮生物的'方法,以圆海链藻为例,以其18S rDNA序列为寻找种特异性引物的靶区域,通过分析18S rDNA序列,设计出适合用于RFQ-PCR的引物与探针,并通过引物PCR验证确定其特异性,进而以圆海链藻荧光定量PCR的引物和探针(Primer Thalassiosira rotula和Taqman Thalassiosira rotula),建立了定量检测圆海链藻的实时荧光定量PCR检测方法(RFQ-PCR).与传统的显微镜计数方法比较,两者所获结果无显著性差异,证明了本方法的可行性,从而为我国沿海水域赤潮问题的研究提供了良好的技术检测途径.作 者：何闪英 吴小刚 HE Shan-ying WU Xiao-gang 作者单位：何闪英,HE Shan-ying(中国海洋大学生命科学与技术学部,山东,青岛,266003)吴小刚,WU Xiao-gang(浙江大学生工食品学院,浙江,杭州,310029)
期 刊：水产学报 ISTICPKU Journal：JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA 年，卷(期)：, 31(2) 分类号：X855 关键词：赤潮 圆海链藻 荧光定量PCR 核糖体小亚基DNA篇8：水稻低丰度表达基因OsAMT1;3实时荧光定量PCR方法的建立及其应用
水稻低丰度表达基因OsAMT1;3实时荧光定量PCR方法的建立及其应用
采用实时荧光定量PCR技术,通过使用特异引物,对水稻中的低丰度表达基因OsAMT1;3进行了转录水平上的定量分析,成功建立了可检测低丰度表达基因的SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台.该方法具有很好的准确性和实用性.获得的荧光定量PCR扩增曲线,基线平整,指数区明显,斜率大且固定;线性范围广,17～36个循环都能测出;稳定性、重复性好,变异系数仅为0.47%;标准曲线表明,循环阈值与PCR体系中起始模板量的'对数值之间有着良好的线性关系,可对基因表达进行相对定量;缺氮条件下OsAMT1;3 与纯NH4+处理相比表达量增加4倍以上.
作 者：孙淑斌 李宝珍 胡江 徐国华 SUN Shu-bin LI Bao-zhen HU Jiang XU Guo-hua 作者单位：南京农业大学,资源与环境科学学院,江苏,南京,210095 刊 名：中国水稻科学 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF RICE SCIENCE 年，卷(期)：2006 20(1) 分类号：Q94-336 Q943 Q945.12 关键词：实时荧光定量PCR 扩增曲线 标准曲线 铵转运蛋白基因 基因表达 研究方法★ 苏云金杆菌营养期杀虫蛋白基因vip3A的检测与杀虫活性测定
乳牛瘦蛋白基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立（精选8篇）
